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瓊脂糖凝膠電泳涉及的步驟

  1. 為了制備凝膠,將瓊脂糖粉與電泳緩沖液混合至所需濃度,并在微波爐中加熱使其熔化。

瓊脂糖凝膠濃度

  • 所用瓊脂糖的百分比取決于要分離的片段的大小。
  • 瓊脂糖的濃度是指瓊脂糖相對于緩沖液體積的百分比(w / v),瓊脂糖凝膠通常在0.2%至3%的范圍內。
  • 瓊脂糖濃度越低,DNA片段遷移越快。
  • 通常,如果目的是分離大的DNA片段,則應使用低濃度的瓊脂糖,如果目的是分離小的DNA片段,則建議使用高濃度的瓊脂糖。
  1. 將溴化乙錠添加到凝膠中(**終濃度為0.5 ug / ml),以促進電泳后DNA的可視化。
  2. 將溶液冷卻至約60°C后,將其倒入裝有樣品梳子的澆鑄盤中,使其在室溫下固化。
  3. 凝膠固化后,將梳子移開,注意不要撕裂孔的底部。
  4. 仍在塑料托盤中的凝膠水平插入電泳儀并用緩沖液覆蓋。
  5. 然后將含有DNA與上樣緩沖液混合的樣品吸移到樣品孔中,將蓋子和電源線放在設備上,并施加電流。
  6. 可以通過觀察電極上的氣泡確認電流。
  7. 鑒于其負電荷,DNA將遷移至通常為紅色的正電極。
  8. DNA遷移到凝膠中的距離可以通過肉眼監測跟蹤染料(如溴酚藍和二甲苯氰染料)的遷移來判斷。
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