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什么原因導致電泳涂片?



您是否想知道科學家如何研究像您的DNA這樣的微小片段?一種方法是凝膠電泳。電泳通常會產生清晰易讀的條帶,非常適合科學解釋,但涂片結果有時會掩蓋數據。

TL; DR(太長;未讀)

凝膠電泳使科學家能夠可視化消化的樣品并測量片段的大小。涂抹不當是由于瓊脂糖凝膠制備不當,未稀釋樣品裝入孔中或使用劣質樣品造成的。

什么是電泳?

凝膠電泳是科學家可視化小分子(例如DNA)的消化樣品并估算這些片段大小的一種方法。為了進行電泳,科學家通過將瓊脂糖懸浮在沸水中來制備凝膠。所得的聚合反應產生了縱橫交錯的糖聚合物,因此該凝膠在化學層面上看起來有點像蜘蛛網。

科學家使用切割儀器在凝膠中形成孔,這樣他們就可以將非常少量的消化樣品加載到孔中。開啟機器會使電能流過凝膠,并且樣品中的碎片開始從孔中行進到凝膠的另一側。由于凝膠是網狀的,較小的碎片會快速穿過基質,而較大的碎片則需要更長的時間才能穿過基質。完成后,凝膠中的黑帶代表不同片段的傳播距離。科學家測量這些條帶,并使用對數計算,根據其遷移的距離確定每個碎片的大小。

科學家希望有清晰的條帶,但有時條帶會涂片。這種涂抹通常是由于凝膠制備不良,未稀釋的樣品上樣至孔中或質量較差的樣品所致。

凝膠準備不理想

當涉及涂抹結果時,一個可能的罪魁禍**是準備不充分的凝膠。令人滿意的凝膠均勻聚合,在流延盤中的整個凝膠中產生均勻的基質。如果一部分凝膠(通常是下半部分)在科學家完成整個托盤傾倒之前凝固,則生成的凝膠將不均勻并產生涂抹的結果。

樣本過多

在將樣品加載到孔中之前,**將這些樣品稀釋到足以通過凝膠的程度,而不會溢出孔。如果由于科學家忘記稀釋樣品或使用了不適當的稀釋因子而使樣品濃度過高,那么碎片對于孔來說將太大而產生污點。

劣質樣品

不良的樣品質量也會造成拖尾現象。例如,被蛋白質污染或含鹽過多的DNA樣品可能會產生拖影。降解或變性的樣品也會產生較差的結果,包括條帶弄臟。

凝膠電泳是科學家觀察消化后的樣品并確定片段大小的**佳方法。精心準備凝膠和樣品,可**大程度地減少涂抹的可能性,并產生清晰的條帶,是科學解釋的理想之選。


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