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凝膠電泳實驗室程序



凝膠電泳是實驗室中用于測量和分類DNA鏈的一種方法。這是必需的,因為即使在大多數顯微鏡下觀察,正常條件下的DNA仍然很小,無法操作。凝膠電泳實驗室使用相對簡單的程序,同樣的基本技術也可以用于分離單個蛋白質。

凝膠基質

要開始凝膠電泳程序,您**先**創建凝膠。通常,使用稱為瓊脂糖的物質將凝膠制成薄片。將瓊脂糖粉放入燒瓶中,然后放入稱為緩沖液的鹽水中。加熱瓊脂糖和緩沖液的混合物,直到兩種物質融化在一起,然后倒入成型模具中。然后在凝膠冷卻之前,將一種稱為梳子的裝置放在模具的一端。凝膠冷卻后,將梳子移開,只留下很小的縫隙,可用來固定DNA樣品。

冷卻的瓊脂糖混合物(稱為凝膠基質)的特殊特性是由于它是用鹽水制成的。通電后,基體將變得導電,從而允許電流沿其長度流動。凝膠基質的另一個特殊性能是規則的微觀孔的存在。這些孔將使DNA鏈穿過凝膠基質并促進分選過程。電泳室

下一步是創建一個電泳室。這是一個矩形的小盒子,兩端的正極和負極電氣連接。腔室通常是淺的,足夠小以適合桌面,并由有機玻璃等透明材料制成。

將鹽水倒入電泳室的底部,凝膠基質略微浸入該溶液中。鹽水有兩個作用:幫助電流流動和保持凝膠基質濕潤。由于DNA由負電荷推動,因此放置基質,使樣品位于負電連接旁邊。

制備DNA

然后制備DNA樣品。由于幾乎看不到溶液中的DNA,因此將一種稱為加載緩沖液的著色劑添加到每個單獨的樣品中。該試劑還可以使DNA溶液增稠,使其流動性更小,更可行。使用移液器將DNA溶液樣品轉移到凝膠基質的每個交替槽中。在每個樣品之??間的空槽中,放置一些長度已知的DNA溶液(稱為DNA標準品),用于實驗控制和比較。

打開電源

現在,打開電泳室。在負電源下,您的DNA樣品將被迫穿過培養室的整個長度。小DNA鏈將更快地通過凝膠基質,并且在短時間內它們會與較長,較慢的鏈分離。著色劑中的染料可讓您追蹤DNA。您將看不到DNA的各個鏈,但是相同長度的鏈會聚在一起。

**后步驟

分離出DNA后,從電泳室中取出基質。然后將DNA染色,以便于測量和檢查。


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