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凝膠電泳染色:使用什么?

電泳是鑒定和分離大分子的常用實驗室程序。它是由莫斯科的一位大學科學家于1800年代初**次觀察到的。像許多發現一樣,這是偶然的,但事實證明它對許多研究場景都有用。通過施加電流,技術人員可以使用顆粒的負電荷或正電荷,使它們遷移穿過瓊脂糖凝膠等多孔基質。當樣品中存在帶正電的分子時,它們將向負電流(陰極)蠕變,而帶負電的分子將向正電流(陽極)遷移。

除了電源和凝膠外,該動力學測試還需要緩沖液以幫助防止溫度和pH值過高。所用凝膠的類型取決于樣品和應用。凝膠是“固體”,但多孔。在凝膠內,較大的分子將更慢地移動,而較小的分子將快速移動。因此,分子大小是分離樣品和鑒定分子的另一種方法。

那么,既然我們了解了電泳的動力學,我們如何看待這些粒子在何處移動?這些分子可能是“宏觀”的,但它們仍然太小而無法用肉眼觀察。我們實驗的**后一個必需成分是污點。一組染料使我們可以直觀地看到顆粒所經過的路徑。從那里,我們可以捕獲圖像以記錄結果。

DNA凝膠污漬

存在幾種在凝膠電泳過程中對核酸染色的選擇。溴化乙錠(EtBr)是****和**常用的DNA染料。它是一種結合DNA的嵌入劑,當暴露于紫外線下時其熒光增加20倍。EtBr是**便宜的DNA染色劑,是許多研究實驗室的理想選擇。但是,EtBr**小心使用,因為它是已知的誘變劑。另外,EtBr要求暴露在紫外線下才能看到,但是會發生分子損傷。當將DNA用于下游應用如克隆時,這就提出了一個問題。

電泳凝膠

核酸染色,通過紫外線觀察。

已經開發出替代的DNA染料,例如SYBR Safe,它們不具有與EtBR相同的誘變特性。SYBR Safe不被認為是危險的,可以使用實驗室的常規污水處理系統進行處理。此外,它在藍光下發出熒光,從而防止了使用紫外線時發生的DNA損傷。

已顯示許多DNA染色劑可抑制聚合酶鏈反應(PCR)。當需要高PCR效率(例如實時定量PCR)時,可行的DNA染料應為Eva Green。與其他常見的電泳染料相比,它在較小程度上限制了PCR。Eva Green還比EtBr等傳統污漬更安全。

蛋白質凝膠污漬

與DNA凝膠類似,蛋白質凝膠染色有多種選擇。兩種**常見的污漬是考馬斯亮藍和銀染。考馬斯是一種陰離子染料,可與蛋白質非特異性結合。一旦去除多余的污漬,蛋白質條帶將顯示為藍色條帶。考馬斯染色由于其易用性和可承受的成本而成為**普遍的蛋白質染色方法。

相反,銀染色比考馬斯亮靈敏,可以檢測相對少量的蛋白質。但是,靈敏度是有代價的,因為銀染劑還可以與多糖和核酸結合,從而在銀染的凝膠上產生雜散帶。

**后的想法

電泳凝膠和緩沖溶液中的化學物質也會影響染料的性能,因此您的家庭作業也是如此。根據您實驗室中的樣品,應用和記錄的測試結果,選擇具有**高潛力的良好測試結果。使用有關樣品和試劑制備,染料量,膠凝時間和溫度,脫色,存儲和其他**任務的**佳實踐。**后,記住你的手套!

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