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南北印跡用水



超純水用于印跡的許多步驟:樣品,緩沖液,凝膠和沖洗液的制備。在進行自身印跡之前,無論是進行Southern印跡還是Northern印跡,樣品制備都需要特別注意用于保護原材料(分別為DNA或RNA)的水質。

主要的樣品制備步驟是通過提取,擴增和預處理使RNA變性以防止形成堿基配對的二級結構,從而進行分離。

水質參數

  • 離子
    帶電分子可以通過改變溶液(緩沖液,樣品等)的整體電荷,然后加速或延遲遷移來干擾遷移電泳步驟。

    在雜交步驟中離子的濃度也很重要。為了在**佳條件下進行雜交,應注意特定的濃度。從幾乎沒有離子的水開始(25°C時的電阻率18.2MΩ•cm)可確保在正確的離子強度和pH值下制備緩沖液。 
  • 有機物
    有機分子會在雜交過程中產生干擾。那些帶負電荷的分子可以像DNA和RNA一樣起作用,并且可以代替DNA或RNA非特異性結合。帶正電的分子實際上可以與DNA或RNA和寡核苷酸結合,從而阻礙或干擾雜交過程。因此,建議使用低TOC值(<10 ppb或µg / L)以確保有機物含量方面的水質良好。 
  • 核酸
    酶核酸酶降解NA樣品。使用超濾可有效去除這些酶。在將水從系統中抽出并使用之前,將超濾器安裝在凈化單元的出口。請參閱“ 無核酸酶水”部分。 
  • 細菌
    細菌釋放可降解核酸樣品的核酸酶。它們含有DNA,可能會干擾要檢查的DNA。**終,它們釋放出離子和有機物,這些離子和有機物可能會對印跡步驟產生負面影響。用Ultrafilter(BioPak)純化的水細菌含量<0.1 cfu / mL。 
總而言之,考慮到與印跡步驟相關的整個過程,水應不含核酸酶和細菌,具有高電阻率和低TOC。所有這些都可以在輸送高純度水的凈水設備的使用點(出口)處使用超濾設備獲得。


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