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核酸印跡


核酸印跡是一種成熟的技術,用于鑒定先前在凝膠中分離的特定核苷酸序列的存在。(

Southern印跡以其**者英**生物學家Edwin Southern命名。在Southern印跡中,分析DNA,在Northern印跡中如果是RNA。在這兩種情況下,來自完整凝膠的DNA或RNA都將轉移到一塊硝酸纖維素膜或尼龍膜上。然后將膜暴露于雜交探針,即具有特定序列的單個DNA片段,要確定其在靶DNA(或RNA)中的存在。對探針DNA進行標記,以便可以通過射線照相,熒光或化學發光法對其進行檢測。

印跡的**步是核酸從凝膠到膜的轉移,這通常使用毛細管轉移方法完成。在此過程中,將凝膠放置在紙芯的頂部,該紙芯浸入包含轉移緩沖液的容器中。膜夾在凝膠和一堆吸收性材料(通常是干紙巾)之間,該吸收性材料通過毛細管作用使轉移緩沖液通過凝膠。然后,凝膠中的核酸分子被緩沖液攜帶并固定在膜上。真空吸印是另一種越來越流行的吸印程序,因為它速度更快且回收率很高。真空印跡法還使用緩沖液流將核酸帶轉移到膜上,但是它使用真空而不是毛細管作用來創建該流。

一旦轉移完成,**初在凝膠上的所有核酸帶就被固定(印跡)在膜上,雜交過程可能開始。將膜與一小段DNA或RNA(探針)一起孵育,該DNA或RNA的序列與膜中特定的DNA或RNA序列互補。這允許探針與膜上的特定DNA片段雜交或結合。探針先前已被標記,通常用放射性原子,熒光染料標記或用酶標記,該酶在與合適的底物孵育后會產生化學發光信號。雜交后,標記的探針允許從膜上許多不同的DNA片段中檢測目標DNA片段。
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