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DNA測序

DNA測序模仿了在染色體復制過程中復制細胞DNA的基本過程,只是該過程是在試管或微量滴定板中使用**少的一組組分完成的。大多數DNA測序技術都要求有一個“模板”(即要確定其序列的DNA的生物學樣品)。“引物”(即與模板區域互補并能夠延伸的短寡核苷酸);DNA聚合酶,按照模板鏈的指示,在引物上依次添加結構單元。和四個構建基塊本身。該技術還**體現一種方法,通過該方法可以檢測添加到底漆中的結構單元的順序。使用選擇的檢測方法,

大多數大型DNA測序設備都使用熒光染料標記和檢測四個堿基,并根據大小通過毛細管電泳分離DNA分子,從而可以識別序列中每個位置的堿基。更具體地說,對于添加到測序反應中的每個結構單元的分子中的一小部分,該結構單元經過化學修飾并用可區分的染料標記,這樣,當將修飾的結構單元隨機添加到從引物,復制“終止”,結果測序反應包含大小不同的分子的混合物。由于每個終止分子的末端均包含染料標記的堿基,因此可以確定與模板互補的鏈的序列。



上圖顯示了一組測序通道,其中電泳用于分離相差一個堿基的分子。激光檢測用于識別每個位置的堿基。使用“ A”為綠色,“ C”為藍色,“ G”為黃色,“ T”為紅色的鍵從下至上“讀取”序列。使用測序儀制造商提供的軟件,可以確定每個位置的染料信噪比,從而可以“調用”適當的堿基。堿基順序顯示在“色譜圖”或“跡線”文件中。
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