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成功傳代培養的技巧:根據您的細胞系定制解離方法

在開發特定細胞系的培養條件時,需要考慮許多參數。我們都知道pH平衡,氧氣水平和血清濃度是導致培養成功或失敗的重要變量。然而,包括與細胞需要相匹配的解離方法的亞培養方案同樣重要。考慮到這一點,我們將審查一些常見的解離實踐背后的原理,以幫助您根據細胞系的特定性質定制您的方法。

懸浮生長的細胞易于亞培養。只要將細胞稀釋到合適的新鮮培養基中,然后用完它們的營養供應,它們就會很好。另一方面,以單層生長的細胞彼此之間以及與培養皿發生蛋白質接觸。**先打破這些細胞,然后將細胞懸浮在培養基中,旋轉并重新鋪板。因此,**特別考慮確保解離條件破壞細胞接觸而不殺死細胞。

胰蛋白酶有時候,但并非總是如此

在決定解離條件時,研究者應考慮細胞產生的鍵的類型。一些貼壁細胞系僅產生微弱的接觸,可以通過簡單地將培養瓶撞擊在您的手掌上,或通過將燒瓶輕敲在臺面上來破壞。其他貼壁細胞系,特別是來自上皮細胞的貼壁細胞系,可形成強大的多蛋白質緊密連接,只能通過酶消化破壞; 在這些情況下,經常使用胰蛋白酶(絲氨酸蛋白酶)。來自上皮的細胞也可以表達鈣粘蛋白,其介導非常強的鈣依賴性粘附物或橋粒連接。在這種情況下,可能需要添加鈣螯合劑(如EDTA)來螯合鈣,以有效地解離細胞。

分離后優化活力

為了在解離后優化細胞活力,反應條件應與細胞接觸的強度相匹配。例如,如果標準胰蛋白酶/ EDTA消化(通常0.05%-0.5%)不能有效消化細胞鍵(在10-15分鐘內),則可能難以在細胞開始死亡之前從細胞中除去細胞,并且細胞活力將受到不利影響。在這種情況下,可能需要更高濃度的胰蛋白酶/ EDTA或其他酶,例如膠原酶。另一方面,如果反應太苛刻,細胞可能裂解或丟失重新附著到板上所需的表面蛋白質,并且任一情況都將導致活力降低。此外,裂解的細胞釋放基因組DNA,導致活細胞結塊,使存活細胞更難重新培養,并且需要添加DNase。

準備是良好分離的**

如果您已將反應強度與細胞系的粘附特性相匹配,但您的細胞仍難以去除,您可能會發現問題在于細胞準備解離的方式。在生長培養基中可能存在抑制胰蛋白酶的元素,例如血清,但是這可以通過在添加解離試劑之前用Dulbecco's PBS(不含鈣或鎂)簡單地沖洗細胞一次或兩次來克服。也可能是細胞保持融合的時間過長。在這些條件下,細胞可能會形成特別強的細胞 - 細胞和細胞 - 表面連接,這些連接特別難以破碎。出于這個原因,以及培養物的整體健康狀況,建議細胞在融合之前進行傳代(即,

結論

通過對解離試劑的工作原理的基本了解,研究人員可以開發出一種優化的方案,該方案同時考慮細胞粘附性的強度和質量。優化的細胞解離方案將確保成功的傳代培養并延長培養細胞的壽命。

 

Carolyn Peluso博士是ATCC的技術作家和細胞生物學**。

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